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第一链cDNA合成试剂盒图片
产品货号:
JN0002
中文名称:
第一链cDNA合成试剂盒
英文名称:
BalbScript First Strand cDNA Synthesis Kit
产品规格:
50次|100次
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

本试剂盒可以mRNA或者总RNA为模板,高效合成第一链cDNA。本试剂盒使用BalbScript Reverse Transcriptase反转录酶(货号:JN0011),它的RNase H的活性与AMV反转录酶相比较低。该反转录酶可耐受42~50℃温度。试剂盒中含有重组RNA酶抑制剂(货号:JN0013),可耐受55℃高温,有效防止RNA降解;同时含有Oligo(dT)18,用于以有poly(A)尾巴的mRNA为模板合成cDNA;本试剂盒也可采用基因特异性引物。合成的第一链cDNA能直接用作PCR或荧光定量PCR的模板,第二链cDNA的合成或线性RNA扩增,也可用于需要用带有放射性或非放射性核苷酸标记第一链cDNA的实验。




  • BalbScript反转录酶无RNase H活性,可避免第一链cDNA合成过程中,RNA/DNA杂交模板链中RNA降解,保证cDNA合成的质量。
  • 反转录反应可使用Random N6或Oligo(dT)18为引物,也可同时使用Random N6和Oligo(dT)18做引物,或使用基因特异性引物进行反转录。



组分50次100次
BalbScript Reverse Transcriptase(200U/μL)50μL100μL
RNase Inhibitor (40U/μL)50μL100μL
5×BalbScript RT Buffer1mL1mL×2
dNTPs (10mM each)200μL400μL
Oligo(dT)18(100μM)100μL200μL
Random N6 (100μM)100μL200μL
GAPDH Forward primer (10μM)20μL40μL
GAPDH Reverse primer (10μM)20μL40μL
RNase-Free Water1mL2×1mL

保存:-20℃


  • 用DEPC处理实验用到的所有实验器材,或购买已经证明无核酸酶的实验用具,实验过程戴手套并经常更换手套,避免RNA酶的污染。
  • 确保所用试剂中无RNA酶污染。
  • 试剂盒要严格密封保存。在反转录过程中,所有管子确保扣严。
  • 纯化过的RNA必须保证不含有盐,金属离子,乙醇和苯酚,以上成分会干扰第一链cDNA合成反应。可采用乙醇沉淀RNA的方法去除掉痕量污染物。
  • 为保证反转录反应有效进行,需使用高质量的RNA模板。
  • 有实验结果提示,本反转录酶可在15分钟内完成1kb反转录反应。



第一链cDNA合成
试剂融化后,可将试剂盒中各组分稍微离心后置于冰上。
  • 按顺序加入以下反应物:
    成分用量
    模板RNA总RNA0.1ng~5μg
    poly(A) mRNA10pg
    特异性RNA0.01pg
    引物Oligo (dT)181μL
    Random N61μL
    基因特异性引物15~20pmol
    5×BalbScript RT Buffer4μL
    RNase Inhibitor1μL
    dNTPs (10mM each)2μL
    BalbScript Reverse Transcriptase1μL
    RNase-Free Water至20μL

    可选步骤:如果RNA模板GC含量高或者含有二级结构,可先将RNA模板和RNase Free Water混匀后,65℃孵育5分钟(有助于打开高级结构,便于下一步反应的进行),迅速置于冰上冷却,再加入其它组分。
  • 轻轻混匀,离心。
  • 42℃孵育15~30分钟(如果RNA模板中不含poly A结构,25℃先孵育5分钟,随后42℃孵育15~30分钟)。
  • 产物可直接用于下一步反应。如果不立即使用,可于-20℃保存一周,长时间保存建议-70℃放置。

相关搜索:第一链cDNA合成试剂盒反转录试剂盒逆转录试剂盒cDNA第一链合成试剂盒RT试剂盒BalbScript First Strand cDNA Synthesis Kit
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